紙層析：是層析中**簡(jiǎn)便的一種。一般的被分離物質(zhì)在兩相中都能溶解的紙層析屬于分配層析，它實(shí)際上是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)相沿紙經(jīng)過(guò)樣品時(shí)，樣品點(diǎn)上的溶質(zhì)在水和有機(jī)相之間不斷進(jìn)行分配，一部分樣品隨流動(dòng)相移動(dòng)，進(jìn)入無(wú)溶質(zhì)區(qū)，此時(shí)又重新分配，一部分溶質(zhì)由流動(dòng)相進(jìn)入固定相（水相）。隨著流動(dòng)相的不斷移動(dòng)，各種不同的部分按其各自的分配系數(shù)不斷進(jìn)行分配，并沿著流動(dòng)相移動(dòng)，從而使物質(zhì)得到分離和提純。當(dāng)層析溶劑不斷從紙上流過(guò)時(shí),由于混合物(葉綠素提取液)中各種成分在固定相和流動(dòng)相間溶解度和吸附能力不同而具有不同的分配系數(shù)，所以移動(dòng)速度不同，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后,可將各種色素分開(kāi)。
研缽，漏斗，凍存管，剪刀，滴管, 濾紙，脫脂棉（或尼龍布或紗布），毛細(xì)管，吸水紙。
藥品試劑：①無(wú)水乙醇和丙酮；②石英砂；③碳酸鈣；④層析液：石油醚10ml+丙酮2ml+苯1ml. 四、
實(shí)驗(yàn)步驟
1.葉綠體色素的提取
(1)取植物新鮮葉片2 g,洗凈,擦干,去掉粗的葉脈，剪碎,放入研缽中； (2)研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉, 研磨**近乎糊狀，加入10-15mL 無(wú)水乙醇,再研磨片刻，提取3-5 min，然后用漏斗（內(nèi)放一層薄的脫脂棉）過(guò)濾,即得色素提取液。 2.葉綠體色素的分離
(1)制備濾紙條：剪去一端兩角，在距離剪角一端1～ 1.5 cm處用鉛筆畫線（或簡(jiǎn)單做個(gè)記號(hào)）。
(2) 畫濾液細(xì)線：用毛細(xì)吸管吸收少量濾液，沿鉛筆線（記號(hào)）處均勻地畫一條直的濾液細(xì)線。干燥后，連續(xù)重復(fù)3～5次，**濾液細(xì)線呈綠色。 (3)分離色素：倒入層析凍存管2～3 ml層析液，適當(dāng)調(diào)節(jié)層析液液面，以放入濾紙條后樣品線**少稍稍高出濾液為宜。以將濾紙條**朝下略微斜靠燒杯內(nèi)壁，輕輕插入層析液，旋緊蓋子 3.（1）取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），
在其中心戳一圓形小孔（直徑約3mm）。
另取一張濾紙條（5cm×1.5cm），用毛細(xì)管吸取葉綠體色素提取液沿紙條的長(zhǎng)度方向涂在紙條的一邊，使色素?cái)U(kuò)散的寬度限制在0.5cm以內(nèi)，風(fēng)干后，再重復(fù)操作數(shù)次，然后沿長(zhǎng)度方向卷成紙捻，使浸過(guò)葉綠體色素溶液的一側(cè)恰在紙捻的一端。
（2）將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿凸出）。
（3）在9cm培養(yǎng)皿內(nèi)放一3cm培養(yǎng)皿，在3cm培養(yǎng)皿中央小室中加入適量的推動(dòng)劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿上，使紙捻下端浸入推動(dòng)劑中。迅速蓋好培養(yǎng)皿。此時(shí)，推動(dòng)劑借毛細(xì)管引力順紙捻擴(kuò)散**圓形濾紙上，并把葉綠體色素向四周推動(dòng)，不久即可看到各種色素的同心圓環(huán)。
所用培養(yǎng)皿底、蓋直徑應(yīng)相同，且略小于濾紙直徑，以便將濾紙架在培養(yǎng)皿邊緣上。
（4）當(dāng)推動(dòng)劑前沿接近濾紙邊緣時(shí)，取出濾紙，風(fēng)干，即可看到分離的各種色素，用鉛筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。
五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
六、
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
當(dāng)推動(dòng)劑前沿接近濾紙上端邊緣時(shí)，取出濾紙，自然晾干，觀察色帶的分布：四種色素在濾紙上的移動(dòng)速度是胡蘿卜素(橙黃色)>葉黃素(黃色)>葉綠素a(藍(lán)綠色)>葉綠素b(黃綠色)。 七、
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、材時(shí)要選取新鮮的顏色較深的葉片，是因?yàn)橐员闶篂V液中含較多的色素；
2、研磨時(shí)加入石英砂的目的是為了研磨得充分，更有效地破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)；但由于二氧化硅粉是特別細(xì)的白色粉末，再加上控制不好用量，易過(guò)量，使濾液中含有較多的二氧化硅，而導(dǎo)致濾液顏色變淺。濾液中雜質(zhì)越多，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象越不明顯。不要加太多！
3、入少許碳酸鈣的目的是為了防止在研磨過(guò)程中，葉綠素受到破壞。因?yàn)槿~綠體分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)鎂原子，當(dāng)細(xì)胞破裂時(shí)，細(xì)胞液內(nèi)有機(jī)酸中的氫可取代鎂原子而成為褐色的去鎂葉綠素，碳酸鈣可中和有
機(jī)酸以防止去鎂反應(yīng)的發(fā)生。
4、研磨要迅速、充分。這是因?yàn)橐皇且驗(yàn)樘崛∫喝菀讚]發(fā)；二是為了使葉綠體完全破裂，從而能提取較多的色素；三是葉綠素極不穩(wěn)定，能被活細(xì)胞中的葉綠素酶水解而破壞。迅速和充分是存在著一定沖突的兩種要求，在實(shí)驗(yàn)中，可采用先不加提取液，研磨幾分鐘后再加入提取液。
5、制備濾紙條時(shí)，根據(jù)邊緣擴(kuò)散原理，物質(zhì)分子沿邊緣擴(kuò)散速度要大于里邊擴(kuò)散的速度，因此要將濾紙條的一端剪去兩角，主要是為了延長(zhǎng)邊緣長(zhǎng)度，這樣可以使色素在濾紙條上擴(kuò)散均勻，便于觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6、畫線時(shí)，一定要細(xì)并且直，這樣可以防止色素帶重疊，使色素分子均勻分布在一條直線上，做到擴(kuò)散起點(diǎn)一致。重復(fù)劃2-3次，是為了增加濾液細(xì)線上的色素分子數(shù)量，使實(shí)驗(yàn)效果更加明顯。 7、分離色素時(shí)，一定不要讓濾紙條上的濾液細(xì)線沒(méi)及到層析液，這是因?yàn)樯匾兹芙庥趯游鲆褐校瑢?dǎo)致色素帶不清晰，影響實(shí)驗(yàn)效果。 分離色素用的圓形濾紙，在中心打的小圓孔，周圍必須整齊，否則分離的色素不是一個(gè)同心圓 #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
八、
問(wèn)題與解答
1、濾液細(xì)線為什么要畫直，要畫幾次？
答：就是為了防止色素帶的重疊；增加色素量，使色素帶的顏色更深一些。
2、為什么要在研磨時(shí)加碳酸鈣和二氧化硅？
答：加二氧化硅是為了充分研磨，加碳酸鈣是為了保護(hù)葉綠體色素。
