薄層色譜層析介紹

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;

1、學(xué)習(xí)薄層色譜法的原理和方法；

2、學(xué)會利用薄層色譜分離提純有機(jī)化合物的規(guī)范操作； 2、掌握比移值的計(jì)算方法； 3、了解比移值的影響因素。二、實(shí)驗(yàn)原理

基本原理：利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他親和作用的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。

分類：柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、液相色譜

薄層色譜(thin layer chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚**0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。依其所采用的薄層材料性質(zhì)和物理、化學(xué)原理的不同，可分為吸附薄層色譜、分配薄層色譜、離子交換薄層色譜和排阻薄層色譜等。

吸附薄層色譜采用硅膠、氧化鋁等吸附劑鋪成薄層，將樣品以毛細(xì)管點(diǎn)在原點(diǎn)處，用移動(dòng)的展開劑將溶質(zhì)解吸，解吸出來的溶質(zhì)隨著展開劑向前移動(dòng)，遇到新的吸附劑，溶質(zhì)又會被吸附，新到的展開劑又會將其解吸，經(jīng)過多次的解吸-吸附-解吸的過程，溶質(zhì)就會隨著展開劑移動(dòng)。吸附力強(qiáng)的溶質(zhì)隨展開劑移動(dòng)慢，吸附力弱的溶質(zhì)隨展開劑移動(dòng)快，這樣不同的組分在薄層板上就得以分離。

一個(gè)化合物在吸附劑上移動(dòng)的距離與展開劑在吸附劑上移動(dòng)的距離的比值稱為該化合物比移值Rf

五、實(shí)驗(yàn)步驟

在洗滌干凈的玻板（15×3cm）上均勻地涂上一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，晾干或吹干后，置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將板取出，干燥后噴以顯色劑或在紫外燈下顯色或直接觀察。

制板（簡易平鋪法）（1）二塊15×3cm玻片，洗凈，控水

取7.5cm×2.5cm載玻片4塊，用去污粉搽洗，再用水淋洗，**后浸入無水乙醇中，取出晾干。取用時(shí)手指只可接觸載玻片的邊緣，不能接觸載玻片兩面。

（2）調(diào)糊：3g硅膠G和8mL0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液在小燒杯中攪勻。在50 mL燒杯中，放入約3g硅膠，加入0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液8mL，調(diào)成糊狀。

（3）鋪層：用牛角匙將此糊狀物傾倒于上述玻璃片上，用食指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振搖擺動(dòng)，反復(fù)數(shù)次，使流動(dòng)的糊狀物均勻地鋪在載玻片上。每組鋪二塊。

（4）活化：將已涂好硅膠G的薄層板放置在水平的長玻璃片上，室溫放置0.5 h后，移入烘箱，緩慢升溫**110 ℃，恒溫0.5 h。取出稍冷放入干燥器中備用。

點(diǎn)樣：

（1）畫線——起始線和前沿線

（2）毛細(xì)管點(diǎn)樣——斑點(diǎn)大小和斑點(diǎn)間間距。用內(nèi)徑小于1mm的毛細(xì)管取樣品溶液，在距離薄層板底端8~10mm處，垂直地輕輕接觸薄層板，斑點(diǎn)直徑要小于2mm，一塊薄層板可點(diǎn)2個(gè)樣品，注意保持一定的距離，但斑點(diǎn)不能太靠邊。

展開：展開劑選擇；展開方法——傾斜上行法。取一有蓋的廣口瓶作色譜器，加入展開劑（用環(huán)己烷︰乙酸乙酯=3～5︰1），展開劑高度不要超過5mm，以免淹沒斑點(diǎn)，然后將已點(diǎn)好樣品的薄層板放入色譜器中，蓋緊，等展開劑上升到接近薄層板上沿時(shí)，打開蓋子，迅速用鉛筆或小針在前沿作一記號取出，晾干。

顯色：直接觀察并量取a、b值，計(jì)算比移值。先用肉眼觀察有無可見的斑點(diǎn)，然后放在紫外線分析儀下觀察熒光斑點(diǎn)，并用小針輕輕勾劃斑點(diǎn)的輪廓，**后放入盛有碘片的瓶中進(jìn)行顯色。

樣品：蒽、香草醛、芴酮及其混合物