柱層析經驗交流介紹

1、選柱子：現在見到的柱子徑高比一般在1:5-10。

2、稱量：100-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠書中寫硅膠量是樣品量的30-40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開（是指在所需組分Rf在0.2--0.4，雜質相差0.1以上），就可以少用硅膠。

3、選洗脫劑：一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統；極性較大的用甲醇：氯仿系統；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統。要使所需點在Rf值在0.2-0.3左右的比較好。常用溶劑的極性順序：石油醚＜環己烷/己烷＜苯乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。

一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑。拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。乙酸乙酯/石油醚= 4:1可用TLC分開。乙酸乙酯和石油醚(60-90)。

4、攪成勻漿：先把硅膠泡在燒杯中，用干硅膠體積一倍的溶劑泡，用超聲波超半個小時，中間看到氣泡時用玻璃棒攪一下。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。

5、裝柱： A、用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和硅膠飽和時放出的熱量可能使產品分解。 B、將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。

C、裝柱時一定要保證無氣泡，同時敲打柱體使柱體更均勻、緊湊，裝畢，用洗脫液沖三次。

6、壓實：裝柱完后，加入更多的石油醚，用雙聯球或氣泵加壓，直**流速恒定。柱床約被壓縮**9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產生開裂。

7、上樣：干法濕法都可以。 A、在硅膠上層加少量無水硫酸鈉（以免樣品被洗脫劑沖散）取適量樣溶液上樣。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞**接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。

B、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降**石英砂面時，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

8、過柱和收集：柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收集餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收集餾分。接收瓶一定要用可密封的。柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產品中的。

9、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開。

10、檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數量級。11、送譜。收集的產品旋干，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的**后純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。

實例一：

工藝：28g一步產物，加入80gDMF溶解，降溫**20℃，20℃-30℃分批加入8.7g（60%含量，1.2eq）鈉氫，立即放氣放熱，顏色由無色變黃渾濁，20℃保溫1h，顏色逐漸變黑。加入36.3g（1eq）2-甲磺酰基-4,6-二甲氧基嘧啶，升溫**55℃保溫1h，65℃保溫1h，TLC檢測。

TLC

后處理：反應液加入300ml乙酸乙酯，用200ml x2水洗，200ml飽和食鹽水洗，有機相用鹽酸40ml x2萃取，水相用50ml乙酸乙酯萃取洗滌，水相加入500ml水，用乙酸乙酯300ml x2萃取，有機相用100ml飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，旋干有機相得到柱前粗品40g，經減壓柱分離得到單草醚甲酯和雙草醚甲酯（雜質2和雜質3）。

減壓柱梯度洗脫：柱前粗品40g，70g硅膠拌樣，100g硅膠上柱，PE:EA=50:1（500ml x50）完成**個點分離；PE:EA=50:1.5（500ml x2），PE:EA=50:2（500ml x2），PE:EA=50:2.5（500ml x2），PE:EA=50:3（500ml x2）PE:EA=50:3.5（500ml x2），PE:EA=50:4.5（500ml x2）PE:EA=50:5（500ml x2）PE:EA=50:7（500ml x2），PE:EA=50:10（500ml x2）完成第二個點分離；

TLC